ELISA試劑盒操作步驟
1.取出酶標(biāo)板,設(shè)空白孔,依照次序?qū)?yīng)分別加入100μl的標(biāo)準(zhǔn)品于空白微孔中(空白孔視為0號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品,用醫(yī)用蒸餾水替代)
2、分別標(biāo)記樣品編號(hào),加入100μl的稀釋樣品于空白微孔中(不同的樣本采用不同的吸頭)。
3、將酶標(biāo)板置于37℃溫育30分鐘;
4、將酶標(biāo)板板取出,將其中的液體甩去,每個(gè)孔中全部加滿應(yīng)用洗滌液后,立即甩去液體;
5、每個(gè)孔中加滿應(yīng)用洗滌液后,輕微振搖酶標(biāo)板30秒后將孔中的應(yīng)用洗滌液甩去,在吸水紙上將酶標(biāo)板拍干。
6、重復(fù)第5個(gè)步驟5次,在吸水紙上將酶標(biāo)板拍干。
7、在標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣品孔中加入100μl的酶標(biāo)偶合溶液。
8、將96孔板置于37℃溫育30分鐘。
9、將酶標(biāo)板取出,將其中的液體甩去,每個(gè)孔中全部加滿應(yīng)用洗滌液后,立即甩去液體。
10、每個(gè)孔中再次加滿洗滌應(yīng)用液后,室溫輕微振搖酶標(biāo)板30秒后將孔中的應(yīng)用洗滌液甩去,在吸水紙上將酶標(biāo)板拍干。
11、重復(fù)第5個(gè)步驟5次,在吸水紙上將酶標(biāo)板拍干。
12、在每個(gè)孔中加入底物A 50μl后立即加入底物B 50μl。輕輕振蕩混勻。(A液、B液采用不同的吸頭加樣)
13、將酶標(biāo)板置于37℃避光溫育反應(yīng)15分鐘。
14、每個(gè)微孔中加入50μl的終止液,輕輕振蕩混勻。
15、在酶標(biāo)儀上,450nm處測(cè)定OD; 顯色后,15分鐘內(nèi)進(jìn)行測(cè)定。
16、根據(jù)制備的標(biāo)準(zhǔn)曲線,計(jì)算樣本含量
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